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RT -PCR Mix for qPCR （ 预混型 逆转录试剂盒）

货号： R1031 规格： 100 次（ 20 µ l 反应体系）

产品说明

RT-PCR Mix for qPCR 是预混型逆转录反应试剂盒，操作简便，可快速高效完成逆转录反应。其中 Enzyme Mix 含有高效逆转录酶和热敏型 DNase ，一步完成基因组 DNA 的清除以及 RNA 的逆转录反应， RT Buffer 包含逆转录反应所需的其他组分，无需分步多次加样，降低了样品污染的风险。同时，本试剂盒配备了 Control Mix ，用于阴性对照反应，检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留。本试剂盒的逆转录产物对染料法和探针法荧光定量 PCR 反应均有很好的兼容性，可进行精准的基因表达分析 。

产品组分

组分	R10 3 1 （ 10 0次 ）
Enzyme Mix	10 0 μl
5X RT Buffer	400  μl
Control Mix	20 μl
RNase-free ddH 2 O	1 ml × 2

保存条件

各组分均 -20 ℃保存，并避免反复冻融。

适用范围

第一链 cDNA 合成

注意事项

l 本品含有热敏型 DNase ，请于冰上使用本品各组分。

l 为保证成分均匀，请将 Enzyme Mix 、 5X RT Buffer 及 Control Mix 分别瞬时离心、吹打混匀后再吸取使用。

l 在操作过程中，注意防止 引入 RNase 导致 RNA 降解 。 RNA 最好保存于 -70℃ ，避免反复冻融。

l cDNA产物应置于 -20℃ 或以下 保存 ， 避免反复冻融 。

操作步骤

1 . 配制反应体系

按以下体系，在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液：

组分	用量
5X RT Buffer	4  μl
Enzyme Mix	1  μl
RNA	1pg-1 µ g
RNase-free ddH 2 O	补足至 20  μl

阴性对照反应（可选）

即不加逆转录酶的反应，产物用于在 qPCR 中作为阴性对照，检验模板 RNA 中是否有基因组 DNA 残留

按以下体系，在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液：

组分	用量
5X RT Buffer	4  μl
Control Mix	1  μl
RNA	1pg-1 µ g
RNase-free ddH 2 O	补足至 20  μl

2. 进行逆转录反应

将上述混合液吹打混匀，瞬时离心收集至管底。按以下程序，在 PCR 仪中进行反应：

温度	时间
50 ℃	15 min
85 ℃	5 sec

3. qPCR 反应及 cDNA 保存

cDNA 产物可稀释后立即进行染料法或探针法 qPCR 反应。若使用未稀释的 cDNA 原液，则体积不能超过反应体系的 1/10 ，以避免抑制反应效率。长期保存 cDNA 产物应于 -20℃ 或以下环境中 ， 并避免反复冻融 。