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TRAzol

产品说明

TRAzol 可以从动物组织、植物材料、各种微生物以及培养细胞等组织材料中提取总 RNA 。样品在 TRAzol 中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层）， RNA 分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总 RNA 。经本制品提取的总 RNA 纯度高，基本不含蛋白质及基因组 DNA ，提取的 RNA 可以直接用于 Northern 杂交、斑点杂交、 mRNA 纯化、体外翻译、 RNA 分解酶的保护分析、 RT-PCR 、构建 cDNA 文库等各种分子生物学实验。

产品组分

货号	R1021 （ 20 次）	R1022 （ 100 次）
TRAzol	20 ml	100 ml
说明书	1 份	1 份

需要自备氯仿、异丙醇、 RNase-free 75% 乙醇、 DEPC 处理水（ R2041/R2042 ）

保存条件

室温运输， 2-8℃ 避光保存。

注意事项

● TRAzol 具有腐蚀性，操作过程中应做好防护，避免直接接触皮肤或吸入口鼻。沾染后应立即用大量清水冲洗，必要时请就医处理。

● 严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的 RNase 污染。操作过程中勤换手套。

● 根据起始材料量的不同使用不同体积的溶液（见下表）。过多或过少的使用量都可能影响 RNA 的质量或产量。若起始材料量很少， RNA 预计产量很低，在异丙醇沉淀时，可加入 20 mg/ml 肝糖原溶液 0.5-1 μl 促进 RNA 沉淀。

● 不同起始材料试剂用量及 TRAzol 用量。

样品用量	TRAzol 的用量
10cm2 的贴壁培养细胞	1 ml
107 的悬浮培养细胞	1-2 ml
100 μl 的白细胞	2 ml
50-100 mg 的普通组织样品	1 ml
50-100 mg 的特殊组织样品（肝、脾、骨及软骨等）	2 ml
15-30 mg 的植物材料（多糖和多酚含量不高的）	1 ml

● 使用本产品提取的 RNA 一般不含有 DNA 污染。在极少数情况下（与组织 pH 值等相关），如果有 DNA 污染而又必须去除，则可以用 RNase-free 的 DNase 处理样品。

● 防止 DNA 污染方法： a. 减少样本起始用量，如将 100 mg 的植物组织减少为 50 mg ，将 30 mg 的动物组织减少为 10 mg ；

                      b. 在加入 TRAzol 之后加入 5-10 ul 3M NaAc(pH5.2) 。

● 请严格遵照操作步骤操作。

● 有关 RNA 的吸光度说明如下：

260 nm 、 320 nm 、 230 nm 、 280 nm 下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。 OD₂₆₀/OD₂₈₀ （ R ）体现了 RNA 中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的 RNA 的 R 值应在 1.8-2.0 之间，当 R<1.8 时，溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显；当 R>2.2 时，说明 RNA 已经被水解成了单核苷酸。在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用 TE Buffer 。

● RNA 浓度 = （ OD₂₆₀-OD₃₂₀ ） × 稀释倍数 ×0.04 μg/μl

操作步骤

1. 实验样品的研磨和匀浆

A. 贴壁培养细胞

倒出培养液，用 1X PBS 清洗一次，每 10 cm² 生长的培养细胞中加入 1ml 的 TRAzol ，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞）。将内含细胞的裂解液转移至ag真人试玩平台中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。室温静置 5 min 。

B. 悬浮培养细胞

将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入ag真人试玩平台中， 8,000 rpm ， 4℃ 离心 2 min ，弃上清，向每 10⁷ 个细胞中加入 l-2 ml 的 TRAzol 。用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀，室温静置 5 min 。

C. 动物组织、植物材料样品

将超低温冻结的 RNA 提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响 RNA 的收率和质量）。对于普通的 RNA 提取样品，可以向研钵中加入适量的 TRAzol ，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。对于特殊样品，如肝、脾、骨及软骨等，可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的 TRAzol 的匀浆管中，把匀浆管置于冰浴中进行匀浆，直至匀浆液呈无颗粒透明状。将匀浆液转移至ag真人试玩平台中，室温静置 5 min 。 12,000 rpm 4 ℃ 离心 5 min ，小心吸取上清液，移入新的ag真人试玩平台中（切勿吸取沉淀）。

2. Total RNA 的提取

1 向上述步骤中的匀浆裂解液中加入氯仿（ TRAzol 的 1/5 体积量），盖紧ag真人试玩平台盖，用力振荡（氯仿沸点低、易挥发，振荡时应小心ag真人试玩平台盖突然弹开）。待充分乳化溶液呈乳白状（无分相现象）后，再室温静置 2 min 。

2  12,000 rpm 4 ℃ 离心 10 min 。

3 从离心机中小心取出ag真人试玩平台，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液、中间的白色层及带有颜色的下层有机相，吸取上清液转移至另一新的ag真人试玩平台中（切忌吸出白色中间层）。

（如样品含有较多多糖多酚，请增加以下步骤：在上清液中加入 0.2X 上清液体积的 5 M NaCl 及 1X 上清液体积的酚 / 氯仿（ 1:1 ），混匀， 12000 rpm 离心 5-10 min ，取上清液加入等体积氯仿，混匀， 12000 rpm 离心  5-10 min ，至第 4 步。）

4 向上清中加入等体积的异丙醇，上下颠倒ag真人试玩平台充分混匀后，在 15-30℃ 下静置 10 min 。

5  12,000 rpm 4℃ 离心 10 min 。一般在离心后，试管底部会出现沉淀。

3. RNA 沉淀的清洗

小心弃去上清，缓慢地沿ag真人试玩平台壁加入 75 ％的乙醇 1 ml （切勿触及沉淀），轻轻上下颠倒洗涤ag真人试玩平台管壁， 12,000 rpm ， 4 ℃ 离心 2 min 后小心弃去乙醇（为了更好地控制 RNA 中的盐离子含量，应尽量除净乙醇），重复洗涤一次。

4. RNA 的溶解

室温干燥沉淀 2-5 min （不可以离心或加热干燥，否则 RNA 将会很难溶解），加入适量的 RNase-free 水溶解沉淀，必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀，待 RNA 沉淀完全溶解后于 -80℃ 保存。